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原位杂交检测---「在线咨询」

发布单位：武汉思特进科技发展有限公司  发布时间：2022-5-6












原位杂交试验

收集斑马鱼的胚胎，在holfretor水中培养，到达所需要的发育时期时，用蛋白酶去除卵膜，用4%---固定，在4℃保存，二十四小时后用50%甲6醇2%---溶液洗，然后换成甲9醇，在-20c 保存，待用(两天和两天以上的胚胎需要用双氧6水处理，去除色素。或者使用---锍脲稀溶液培养，可阻断色素的形成)





原位杂交是指；分子杂交的一种形式。由未经抽---离的染色体dna，在原来位置上被变性成单链后，与探针进行分子杂交。1977年由本顿(w.d.benton)和戴维斯(r.w.davis)在原分子杂交基础上发展的一种较新的分子杂交技术。方法是将菌落或噬菌斑转移到硝9酸纤维素滤膜上，使在原位发生溶菌后变性的dna，同滤膜原位结合，再与有放5射性同位素标记的特定核苷酸“探针”杂交，其结果可用放5射自显影来显示，出现银粒的地方便是待测染色体dna上与探针互补顺序所在的位置。对快速检测转化群落中的dna序列或任何一种插入的dna序列，以及动植物的基因定位工作，都具有广泛应用价值。(见“分子杂交”、“放5射自显影”、“影印培养技术”)




另一种多聚体促进剂是聚丙0烯0酸，用其钠盐，浓度为2%～4%。与---葡聚糖相比，其优点是价格低廉，粘度低（mw=90 000）。小分子化学试剂酚和guandine thiocyanate也能促进杂交，它们可能是通过增加水的疏水性和降低双链和单链dna间的能量差异而发挥作用。酚作为杂交促进剂，只能在低dna浓度的液相杂交中观察到，该方法曾被称为酚乳化复性技术，该法不能用于固相杂交，因酚可引起---与膜的非特异吸附作用，即使在液相杂交中的应用也是有限的。而guandine thiocyanate可通过降低双链dna的tm值而起作用。此外，该分子还可以促进rna的杂交，有裂解细胞而抑制rnase的作用。总之，---葡聚糖和---因能用于固相杂交是目前zui常用的杂交促进剂。




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