思特进科技发展公司-沈阳洋葱亚细胞定位方法

武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的---公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原---白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、---、细胞等生物实验。

目的构建通用型植物gfp标签蛋白表达载体，研究蛋白质的细胞内定位对蛋白质组学和代谢组学等研究的意义。方法构建2种gfp标签蛋白质表达载体，分别在gfp的n和c端预留位点，以目的基因。利用该基因载体，分别内切酶fok i的切割结构域与ms2噬菌体外壳蛋白mcp的串联蛋白（fok i：mcp：fok i，fmf）至gfp的n和c端，得到fmf与gfp的融合蛋白gfp：fmf和fmf：gfp，其中fmf的n端带有细胞核定位信号。利用农介导植物瞬时表达侵染本氏和洋葱表皮细胞，观察gfp荧光表达情况。结果成功构建了2种融合了目的基因和gfp的表达载体p er35gfp-fmf和p er35fmf-gfp。激光共---结果显示侵染了只含gfp载体的农的细胞，可在细胞核和细胞质中检测到gfp的绿色荧光，而侵染了含核定位信号fmf：gfp和gfp：fmf 2种融合蛋白载体的农的细胞，只在细胞核中观察到绿色荧光。结论该载体系统可运用于研究蛋白质在植物细胞中的亚细胞定位，具有简单、和通用性的特点。