承德洋葱亚细胞定位方法-武汉思特进公司

武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的---公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原---白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、---、细胞等生物实验。

植物细胞壁抗降解屏障是---秸秆生物质资源化转化利用的关键因素，而木质纤维素的阿魏酸化是禾本科植物细胞壁抗降解屏障形成的重要分子基础。植物阿魏酰基转移酶(feruloyl transferase)是负责将阿魏酸从阿魏酰coa转移至阿拉伯木聚糖分子上的关键酶之一，在阿拉伯木聚糖与木质素的连接上起到关键作用，与植物细胞壁抗降解屏障的形成关系十分密切，因此对阿魏酰基转移酶基因开展研究将可以为禾本科能源植物开发利用以及农作物秸秆的再生利用提供新的思路。本文对禾本科模式植物二穗短柄草(brachypodium distachyon)中的一个可能的阿魏酰基转移酶基因bra1进行研究，其主要研究结果如下:1.以二穗短柄草成熟茎组织mrna为材料，洋葱亚细胞定位方法，采用rt-pcr技术得到了bra1(5g14720)基因的全长cdna序列，其序列大小为1369 bp，生物信息学分析表明该基因的开放阅读框(orf)编码443个---酸残基，其编码蛋白质的理论分子为48.45 kda。进一步的基因原核表达以及蛋白质谱分析也表明该基因的开放阅读框能正确编码一个bahd酰基转移酶蛋白，其分子量大小与理论值基本一致。2.bra1编码蛋白的---酸序列中包含有bahd酰基转移酶家族特有的hxxxd功能区以及dfgwg保守结构域，说明bra1基因是bahd酰基转移酶基因家族的一个成员。

武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的---公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原---白表达平台、日化产品生产平台；可以开展各类动、植物、---、细胞等生物实验。

目的构建通用型植物gfp标签蛋白表达载体，研究蛋白质的细胞内定位对蛋白质组学和代谢组学等研究的意义。方法构建2种gfp标签蛋白质表达载体，分别在gfp的n和c端预留位点，以目的基因。利用该基因载体，分别内切酶fok i的切割结构域与ms2噬菌体外壳蛋白mcp的串联蛋白（fok i：mcp：fok i，fmf）至gfp的n和c端，得到fmf与gfp的融合蛋白gfp：fmf和fmf：gfp，其中fmf的n端带有细胞核定位信号。利用农介导植物瞬时表达侵染本氏和洋葱表皮细胞，观察gfp荧光表达情况。结果成功构建了2种融合了目的基因和gfp的表达载体p er35gfp-fmf和p er35fmf-gfp。激光共---结果显示侵染了只含gfp载体的农的细胞，可在细胞核和细胞质中检测到gfp的绿色荧光，而侵染了含核定位信号fmf：gfp和gfp：fmf 2种融合蛋白载体的农的细胞，只在细胞核中观察到绿色荧光。结论该载体系统可运用于研究蛋白质在植物细胞中的亚细胞定位，具有简单、和通用性的特点。